Sigade ägeda diarröa sündroomi koroonaviirus (SADS-CoV) on äsja avastatud sigade enterokatogeenne koronaviirus, mis võib põhjustada vastsündinud põrsastel vesist kõhulahtisust ja põhjustada seatööstusele olulist majanduslikku kahju.Praegu puudub SADS-CoV nakkuse ja vaktsiini efektiivsuse hindamiseks sobiv seroloogiline meetod, mistõttu on tungiv vajadus selle puuduse korvamiseks kasutada tõhusat ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsi (ELISA).Siin konstrueeriti inimese IgG Fc domeeniga liidetud SADS-CoV spike (S) valku ekspresseeriv rekombinantne plasmiid, mis toodab rekombinantset bakuloviirust ja ekspresseeriti HEK 293F rakkudes.S-Fc valk puhastatakse proteiin G vaiguga ja säilitab reaktiivsuse inimese Fc- ja SADS-CoV-vastaste antikehadega.Seejärel kasutati S-Fc valku kaudse ELISA (S-iELISA) väljatöötamiseks ja S-iELISA reaktsioonitingimuste optimeerimiseks.Selle tulemusena, analüüsides 40 SADS-CoV negatiivse seerumi OD450nm väärtust, mis kinnitati immunofluorestsentsanalüüsi (IFA) ja Western blot analüüsiga, määrati piirväärtuseks 0,3711.6 SADS-CoV positiivse seerumi variatsioonikoefitsient (CV) S-iELISA katsetes ja nende vahel olid kõik alla 10%.Ristreaktiivsuse test näitas, et S-iELISA-l puudub ristreaktiivsus teiste seaviiruse seerumitega.Lisaks oli 111 kliinilise seerumiproovi tuvastamise põhjal IFA ja S-iELISA üldine kokkulangevus 97,3%.Viiruse neutraliseerimise test 7 erineva seerumi OD450nm väärtusega näitas, et S-iELISA abil tuvastatud OD450nm väärtus oli positiivses korrelatsioonis viiruse neutraliseerimise testiga.Lõpuks viidi S-iELISA läbi 300 seafarmi seerumiprooviga.Muude sigade enteroviiruste kaubanduslikud komplektid näitasid, et SADS-CoV, TGEV, PDCoV ja PEDV IgG positiivsed määrad olid vastavalt 81,7%, 54% ja 65,3%., vastavalt 6%.Tulemused näitavad, et S-iELISA on spetsiifiline, tundlik ja reprodutseeritav ning seda saab kasutada SADS-CoV nakkuse tuvastamiseks seakasvatuses.See artikkel on autoriõigusega kaitstud.kõik õigused kaitstud.
Postitusaeg: 22. juuni 2021